Introdução: Os receptores do peptídeo insulinotrópico dependente de glicose (GIPR) e do hormônio luteinizante (LHCGR) são receptores acoplados à proteína G com amplo padrão de expressão tecidual. A expressão anômala destes receptores tem sido descrita em casos de hiperplasia adrenal macronodular independente de ACTH (AIMAH) e em alguns adenomas, resultando em aumento da secreção hormonal (cortisol, andrógenos e aldosterona) pelo cortex adrenal. O papel destes receptores em outras formas de hiperplasia, como a doença adrenocortical nodular pigmentosa primária (PPNAD), aumento da adrenal associado à neoplasia endócrina múltipla tipo 1 (MEN1), e em carcinoma do córtex adrenal tem sido pouco investigado; sendo assim, considera-se relevante estudar a expressão destes receptores nos pacientes com tumores adrenocorticais esporádicos, nos pacientes com AIMAH, PPNAD e aumento adrenal associado à MEN1. Objetivos: 1) Caracterização molecular dos casos de neoplasia endócrina múltipla tipo 1 e PPNAD: pesquisa de mutações dos genes MEN1 e PRKAR1A e análise da perda de heterozigose (LOH) destes genes no tecido adrenal destes pacientes. 2) Quantificar a expressão do GIPR e do LHCGR em tecido adrenocortical normal, tumoral...

O câncer de mama é o carcinoma que mais acomete mulheres no Brasil. Os tratamentos disponíveis são recomendados a partir da análise de fatores de prognóstico como a classificação pelo sistema TNM, tipo histológico, status de receptores hormonais e marcadores de proliferação tumoral. No entanto, a classificação dos tumores de mama é muito variável e o poder prognóstico dos marcadores tumorais atuais ainda é limitado, levando muitas pacientes à terapia adjuvante desnecessária. Portanto, novos métodos de prognóstico mais sensíveis são necessários para melhorar a tomada de decisão na clínica oncológica de pacientes com câncer de mama. Do ponto de vista de ciência básica, as modificações transcricionais associadas à oncogênese e progressão do câncer de mama ainda são pouco conhecidas. Além da alteração na expressão de genes codificadores para proteínas, evidências recentes sugerem que RNAs não-codificadores (ncRNAs) podem ter um papel importante na transformação maligna. Este projeto teve como principais objetivos: i) investigar a expressão de ncRNAs intrônicos em amostras de adenocarcinoma de mama e ii) identificar assinaturas de expressão gênica associadas a características anatomo-patológicas e clínicas de tumores de mama com potencial aplicação clínica. Para isso...

Estudos recentes demonstraram que a variação de expressão alelo-específica é mais comum do que se imaginou, podendo chegar, em humanos, a 50% dos genes. Identificar os genes submetidos ao controle de expressão alelo-específica é muito importante para o entendimento de várias doenças, incluindo o câncer. A identificação dos alvos desse tipo de regulação diferencial é difícil, principalmente devido à dificuldade de se avaliar a expressão de cada alelo individualmente. Neste trabalho, abordamos este problema com uma estratégia de análise in-silico, fundamentada na integração de dados públicos do genoma humano, dados de expressão (como cDNAs, SAGE e MPSS) e dados sobre polimorfismos (SNPs). Desenvolvemos um banco de dados de polimorfismos de base única (Single-Nucleotide Polymorphism - SNPs) associados a etiquetas alternativas de SAGE (Serial Analysis of Gene Expression) e MPSS (massively parallel signature sequencing). SAGE e MPSS são técnicas desenvolvidas para análise da expressão de genes em larga escala. Ambas as técnicas têm como princípio a produção de pequenas seqüências marcadoras (etiquetas), adjacentes aos sítios de enzimas de restrição que estiverem mais próximo da cauda poli-A do RNA mensageiro. Tais etiquetas são seqüenciadas em grande escala e a quantidade de etiquetas é usada para medir a abundância relativa dos RNAs mensageiros correspondentes. A presença de SNPs nos sítios de restrição ou nas seqüências das etiquetas pode gerar etiquetas distintas para alelos do mesmo gene...

Introdução: As CYP3A4 e CYP3A5 são enzimas do citocromo P450 responsáveis pela biotransformação de esteróides endógenos e vários fármacos, entre eles as estatinas. Polimorfismos nos genes CYP3A4 e CYP3A5 (CYP3A4*1B, CYP3A5*3C e CYP3A5*1D) foram associados com diferenças na resposta hipolipemiante de indivíduos tratados com atorvastatina e sinvastatina. Neste estudo foram avaliados os efeitos de hipolipemiantes sobre a expressão e a atividade de CYP3A4 e CYP3A5, em linhagens celulares HepG2 e Caco-2 e em CMSP de indivíduos hipercolesterolêmicos, e sua relação com variantes de CYP3A4 e CYP3A5. Métodos: Foram analisados 99 indivíduos normolipidêmicos (NL) e 139 hipercolesterolêmicos (HC). Os HC foram tratados com atorvastatina (10 mg/dia/4 semanas). A genotipagem das variantes CYP3A4*1B, CYP3A5*3C e CYP3A5*1D foi feita por PCR-RFLP ou sequenciamento. A análise da expressão de RNAm de CYP3A4 e CYP3A5 foi avaliada por PCR em tempo real quantitativo (PCRq). As proteínas totais de HepG2 foram avaliadas por Western Blotting. A atividade de CYP3A4 e CYP3A5 in vivo foi avaliada pela relação entre cortisol e seu metabólito, 6β-hidróxicortisol, na urina (razão 6βOH-cortisol/cortisol), por CLAE. Resultados: O perfil de expressão basal de RNAm de CYP3A4 e CYP3A5 é diferente entre HepG2 e Caco-2. Caco-2 expressa 31 vezes mais CYP3A4 e 122 vezes mais CYP3A5 que HepG2. Em células HepG2 tratadas por 12 h...

Doenças Mieloproliferativas Crônicas são desordens hematológicas malignas caracterizadas pela alteração na célula-tronco hematopoética e independência ou hipersensibilidade dos progenitores hematopoéticos a citocinas. Em 2008 a OMS renomeou esse grupo como Neoplasias Mieloproliferativas (NMPs), no qual estão inclusas as entidades nosológicas Policitemia Vera (PV), Trombocitemia Essencial (TE) e Mielofibrose Primária (MFP), doenças alvo desse estudo. Apesar dos avanços no diagnóstico das NMPs e nos mecanismos envolvidos com a fisiopatologia dessas doenças, sua patogênese permanece desconhecida. Alterações na maquinaria apoptótica parecem estar envolvidas em na fisiopatologia das NMP e por isso a compreensão dos mecanismos de regulação da apoptose e a interferência das galectinas-1 e 3 nesse processo, em pacientes com NMPs, é relevante para a busca de novos alvos terapêuticos. Neste contexto, os objetivos deste trabalho foram: avaliar em leucócitos de sangue periférico e células tronco hematopoéticas CD34+ de medula óssea dos pacientes com PV, TE e MFP os níveis de expressão das LGALS1 e LGALS3 e a concentração de galectina-3 plasmática. Foram determinadas as correlações dos níveis de expressão de LGALS1 e LGALS3 e da concentração da galectina-3 plasmática com os níveis de expressão do RNAm das moléculas reguladoras da apoptose e com os dados clínico-laboratoriais dos pacientes como a concentração de hemoglobina...

O desenvolvimento e invasão de tumores cerebrais primários são diretamente influenciados pela matriz extracelular. Considerando que lisil oxidase (LOX) e os demais membros da família das lisil oxidases (LOXL1, LOXL2, LOXL3 e LOXL4) apresentam complexidade tanto estrutural quanto funcional e estão envolvidos em processos biológicos vitais, como motilidade celular, sinalização celular e regulação gênica, a desregulação da expressão destas proteínas pode levar à gênese e progressão tumoral. O presente trabalho teve como objetivos avaliar os níveis de expressão dos genes que codificam todos os membros da família das lisil oxidases em astrocitomas de diferentes graus de malignidade e correlacionar com a expressão de BMP1 e HIF1A, mutação de IDH1 e tempo de sobrevida total dos pacientes. Adicionalmente, as expressões das proteínas codificadas por estes genes foram também realizadas, além de um estudo funcional in vitro do papel de LOX em astrocitomas. A análise da expressão dos genes foi realizada por PCR quantitativa em tempo real numa série de 153 astrocitomas e 22 amostras de tecido cerebral não neoplásico. A expressão proteica foi conduzida por imuno-histoquímica em amostras de astrocitomas. O silenciamento da expressão de LOX foi realizado em linhagens celulares de glioblastoma humano U87MG e A172 transfectadas com o siRNA para os ensaios funcionais. A expressão de todos os genes (LOX...

O controle da contaminação de alimentos por Listeria monocytogenes é um desafio para a indústria, pois a bactéria é tolerante a muitas condições adversas que são empregadas para conservação de alimentos. L. monocytogenes é uma bactéria patogênica e pode causar doença de natureza não entérica grave, em pessoas imunocomprometidas, idosas e durante a gestação. No presente estudo foi avaliada a expressão gênica de duas linhagens L. monocytogenes IAL 633 sorotipo 1/2a mais comumente isoladas de alimentos e L. monocytogenes ATCC 19115 sorotipo 4b mais comumente encontradas em surtos hospitalares, utilizando caldos modelos formulados a partir de extratos de carne e peptona de peixe, suplementados ou não com glicose, cloreto de sódio, orégano, pimenta do reino e uma mistura desses ingredientes. Os caldos modelos formulados e suplementados ou não com os ingredientes foram incubados por 1 hora a 25ºC e em seguida, foi realizada extração de RNA e síntese de DNA complementar (cDNA). O cDNA foi amplificado e quantificado por PCR em tempo real, com primers para os genes alvos prfA, inlA, actA e hly, que codificam respectivamente o fator regulador positivo, internalina A, actina e hemolisina, relacionados à virulência desta bactéria. L. monocytogenes IAL 633 sorotipo 1/2a cultivada em caldo de carne acrescido de glicose diminuiu a expressão de prfA...

O papel da hiperglicemia na patogênese das complicações crônicas do diabetes mellitus tipo 1 (DM1) está bem estabelecido; um dos mecanismos propostos para explicar seus efeitos deletérios é o aumento da formação dos produtos finais de glicação avançada (AGEs). Os AGEs alteram irreversivelmente a estrutura de macromoléculas, comprometendo sua função biológica. Além disso, a interação com receptores para AGE (RAGEs) favorece vias de transdução de sinal que culminam na geração de espécies reativas de oxigênio (EROs). Um segundo tipo de receptor de AGEs, o AGER1 contrapõe-se à toxicidade dos AGEs, graças ao estímulo à atividade antioxidante e à redução do estresse inflamatório. Uma enzima de potencial interesse é a sirtuína 1, uma desacetilase que desempenha importante papel na resposta ao estresse e a compostos tóxicos e que parece ter sua atividade diminuída no DM, sendo negativamente modulada pelos AGEs. O sistema tiorredoxina (TXN) é um dos principais sistemas antioxidantes endógenos; a TXN é capaz de interagir com várias proteínas, tal como a TXN interacting protein (TXNIP), implicada na patogênese do DM e de suas complicações. Há poucos estudos na literatura abordando a expressão de receptores de AGEs e sua associação com complicações crônicas microvasculares no DM1. Os objetivos deste trabalho foram avaliar a expressão do mRNA dos genes que codificam o RAGE (AGER)...

Nos peixes, o crescimento muscular ocorre por hipertrofia e hiperplasia a partir da proliferação e diferenciação das células satélites, processos regulados pela expressão de fatores de transcrição e de crescimento. Os objetivos desse trabalho foram: (1) avaliar a morfologia, morfometria e expressão gênica da MyoD, miogenina e IGF-I na musculatura branca do pacu (Piaractus mesopotamicus) com 45, 90, 180, 400 dias pós-eclosão (dpe) e adultos (n=8) e (2) avaliar a expressão gênica da MyoD, miogenina e miostatina na musculatura branca e vermelha de pacus adultos (n=8). Em todos os grupos, fragmentos da musculatura branca foram dissecados e congelados em nitrogênio líquido. Nos adultos, também foram coletados fragmentos de músculo vermelho. Cortes histológicos (10 ?m) da musculatura branca, obtidos em criostato, foram corados com hematoxilina-eosina para avaliação da morfologia e morfometria. Em cada animal, foi determinado o menor diâmetro de 100 fibras musculares brancas que foram distribuídas em classes, na dependência do seu diâmetro (<20 ?m, 20-50 ?m, >50 ?m), para avaliar a hiperplasia e hipertrofia. A expressão gênica foi analisada por reação em cadeia da polimerase após transcrição reversa em tempo real. A morfologia da musculatura branca foi semelhante em todos os grupos. No grupo 45 dpe...

Differences in gene expression are thought to be an important source of phenotypic diversity, so dissecting the genetic components of natural variation in gene expression is important for understanding the evolutionary mechanisms that lead to adaptation. Gene expression is a complex trait that, in diploid organisms, results from transcription of both maternal and paternal alleles. Directly measuring allelic expression rather than total gene expression offers greater insight into regulatory variation. The recent emergence of high-throughput sequencing offers an unprecedented opportunity to study allelic transcription at a genomic scale for virtually any species. By sequencing transcript pools derived from heterozygous individuals, estimates of allelic expression can be directly obtained. The statistical power of this approach is influenced by the number of transcripts sequenced and the ability to unambiguously assign individual sequence fragments to specific alleles on the basis of transcribed nucleotide polymorphisms. Here, using mathematical modelling and computer simulations, we determine the minimum sequencing depth required to accurately measure relative allelic expression and detect allelic imbalance via high-throughput sequencing under a variety of conditions. We conclude that...

Thesis (Ph.D.)--Brock University, 2010.; Brock University. Dept. of Biological Sciences. Thesis; Adenoviruses have been used as a model system for understanding gene expression, DNA replication, gene delivery and other molecular biological phenomenon. In this project, adenovirus was used as a model to study exogenous gene expression in mammalian cells. More specifically, several adenoviral components were identified to enhance gene expression together with components needed for viral DNA replication. The adenoviral elements that enhance gene expression were assembled in an expression vector (pEl). These include the viral inverted terminal repeats (ITRs), the El region, the major late promoter (MLP) and the tripartite leader sequence (TPL). The green florescence protein (GFP) was used as a reporter gene. Various aspects of gene expression were examined including DNA delivery and stability inside the cells as well as mRNA transcription and protein expression. First, the effect of DNA quality on its delivery, stability and expreSSIOn III mammalian cells was studied. Five different conditions of the major DNA contaminants were used in this investigation including ethidium bromide (EtBr) , cesium chloride (CsCl), EtBr/CsCl...

Im ersten Teil dieser Arbeit wurde eine Methode zur Anreicherung von NK-Zellen untersucht im Hinblick auf die Reinheit und Funktionalität der NK-Zellen und effektive Depletion der T-Zellen. Dabei wurde an eine Positivanreicherung der NK-Zellen mit CD56-MACS-Beads eine T-Zell-Depletion mit CD3-Dynabeads angeschlossen. Durchflußzytometrisch ergab sich nach beiden Schritten der Anreicherung eine Reinheit der CD56+/CD3- Zellen von 96,84 +- 3,34%, während der Anteil der T-Zellen 0,39 +- 0,29 % betrug. Damit lag die Reinheit der NK-Zellen im bzw. deutlich über dem Bereich, der in anderen Studien beschrieben wurde, die Ausbeute lag mit 71,4 +- 15,79% trotz des zweiten Schrittes über den in der Literatur bisher veröffentlichen Werten. Die Effektivität der T-Zell-Depletion wurde zudem funktionell in Proliferationsassays untersucht und zeigte eine deutliche Reduktion des alloreaktiven Proliferationspotentials der angereicherten Zellen. Die zytotoxische Funktionalität der angereicherten NK-Zellen wurde gegenüber der Zellinie K562 getestet und zeigte einen starken Anstieg nach den einzelnen Anreicherungsschritten gemäß dem höheren Anteil der NK-Zellen in der Effektor-Zell-Fraktion. Maximale Werte konnten dabei durch zusätzliche Stimulation über Nacht mit Interleukin 2 erzielt werden. Im zweiten Teil dieser Arbeit wurde die zytotoxische Aktivität der so angereicherten NK-Zellen gegenüber den Blasten pädiatrischer Patienten mit einer akuten lymphatischen Leukämie und deren Abhängigkeit von der Expression von HLA-Klasse-I- und Adhäsionsmolekülen auf den leukämischen Blasten untersucht. Gegenüber leukämischen Blasten zeigten die angereicherten NK-Zellen durchschnittlich nur eine geringe Spontanaktivität...

Hyperlipidämie ist ein wichtiger Risikofaktor für die Entwicklung eines Diabetes mellitus Typ II. Es ist bekannt, dass einzelne Fettsäuren in vitro die Gen-Expression und Protein-Synthese von Genen in gleicher Weise verändern können, wie sie in vivo bei Erkrankten gefunden werden. Da in vivo auf die Zellen immer eine Mischung von Fettsäuren einwirkt, wurde untersucht, wie Palmitat als gesättigte und Linoleat als ungesättigte Fettsäure alleine und in Kombination die Gen-Expression quantitativ verändern. Wegen der Bedeutung vaskulärer Komplikationen beim Diabetes mellitus Typ II wurden mit CAEC (coronary artery endothelial cells) und CASMC (coronary artery smooth muscle cells) menschliche vaskuläre Zellen untersucht, als Vergleich dienten HepG2-Zellen als Modell menschlicher Leber-Zellen. Weder bei Fetuin oder bei PPARgamma (Peroxisome Proliferator Activated Receptor Gamma) in HepG2-Zellen noch bei der eNOS (endothelial Nitric Oxide Synthase) in CAEC konnte eine deutliche Änderung der Gen-Expression festgestellt werden. In HepG2-Zellen steigerten Palmitat oder Linoleat, nicht aber deren Kombination, die PGC-1alpha-Gen-Expression (PPARgamma Coactivator 1 alpha) um etwa das 1,4-fache, während in den vaskulären Zellen keine klare PGC-1alpha-Gen-Expression festgestellt wurde. Die Palmitat-induzierte Steigerung der IL-6-Gen-Expression (Inteleukin-6) in CAEC wurde durch Linoleat unterdrückt...

Zielsetzung: Viele Studien deuten darauf hin, dass eine Epo-Behandlung von Patienten mit unterschiedlichen Krebsleiden das Tumorwachstum über im Tumorgewebe exprimierte Epo-Rezeptoren fördert. Diese Studie untersucht den Zusammenhang zwischen der Erythropoietin-Rezeptor-Expression in kolorektalen Karzinomen (CRC) und dem Gesamtüberleben der betroffenen Patienten. Versuchsplan: Für die Untersuchung wurden 426 Gewebsschnitte von CRC-Patienten unter einem Transmissionslichtmikroskop ausgewertet. Die Gewebsschnitte wurden immunhistochemisch angefärbt, um Epo-R und EPO sichtbar zu machen. Die Auswertung der Epo-R- und Epo-Expression erfolgte durch die Bewertung von „intensity“ und „extent of staining“. Anschließend wurden mehrere Cut-off-Einteilungen für die Epo-R-Expression auf eine Korrelation mit der Patientenüberlebenszeit überprüft. Ergebnisse: Alle 426 Gewebsschnitte zeigten eine Epo-R-Expression, während die Expression von EPO nur in ca. einem Viertel der Schnitte zu finden war. Weder in der univariaten noch in der multivariaten Analyse konnte eine positive Korrelation zwischen der Epo-R Expression in kolorektalen Tumorzellen und dem Gesamtüberleben der CRC-Patienten gezeigt werden. Folgerung: Die Epo-R-Expression in kolorektalen Karzinomen hat keinen Einfluss auf das Gesamtüberleben der betroffenen Patienten und kann auch nicht als Prognosefaktor für das Patienten-Outcome dienen. Die in dieser Studie verwendeten Gewebsschnitte stammen von Patienten...

C. albicans ist der häufigste humanpathogene Pilz. Dabei ermöglicht ihm insbesondere seine Fähigkeit zur Ausprägung zweier unterschiedlicher morphologischer Wachstumsformen (Hyphen- und Hefeform) eine spezifische Anpassung an die jeweiligen Umgebungsverhältnisse im Wirt. Zum einen wird durch die Ausbildung von Hyphen eine bessere Adhärenz und auch eine erleichterte Invasion der äußeren Zellbarriere erreicht, zum anderen erfolgt in der Hefeform eine effizientere Dissemination im menschlichen Blutkreislauf. Der Übergang zwischen den verschiedenen Wachstumsformen wird durch ein komplexes Netzwerk verschiedener Signaltransduktionswege reguliert. Eine tragende Rolle kommt hierbei dem Transkriptionsfaktor Tec1p, einem Mitglied der TEA/ATTS-Transkriptionsfaktoren-Familie, zu. Dieser übt einen regulativen Effekt auf zahlreiche hyphenspezifische Gene aus, unter anderem auf BCR1 und ALS3. Dabei ist nach wie vor unklar, durch welche Wechselwirkung auf DNA-Ebene Tec1p diesen Effekt entfaltet. Es sind sowohl eine direkte Bindung über spezifische TCS-Motive als auch indirekte Wirkungen über Induktion anderer Transkriptionsfaktoren denkbar. So geht man zwar davon aus, dass Bcr1p einen direkten Effekt auf die ALS3-Expression hat (Argimón et al...

Introdução: Os imunossupressores das classes inibidores da calcineurina (tacrolimo) e da rapamicina (sirolimo) requerem controle terapêutico por apresentarem grande variabilidade farmacocinética que tem sido atribuída a fatores genéticos, entre outros. Poucos estudos avaliaram a expressão de genes alvo de imunossupressores e sua relação com a resposta terapêutica. Objetivo: Estudar a relação entre o perfil de expressão de genes alvos de tacrolimo e sirolimo e de microRNAs reguladores e a resposta à imunossupressores utilizados na profilaxia de rejeição ao transplante renal. Métodos: Participaram deste estudo 37 indivíduos submetidos ao transplante renal, no Hospital do Rim e Hipertensão da UNIFESP, de ambos os sexos, com idade acima de 18 anos e de qualquer etnia. Os pacientes foram tratados com esquema imunossupressor contendo tacrolimo, micofenolato de sódio e prednisona até o 3º mês quando foram randomizados para manter a terapia inicial (grupo TAC) ou para a conversão para sirolimo (grupo SRL). Os pacientes com disfunção renal ou suspeita de rejeição, no 3º mês, seguiram o tratamento inicial e foram avaliados em separado (grupo TACex). Os parâmetros de função renal e concentração sanguínea dos fármacos foram utilizados para monitoramento da terapia. A expressão de mRNA de MTOR...

Eine Zunahme des Fettgewebes (Diabeteskranken, Übergewichtigen) führt zwangsläufig zu einer Erhöhung der freien Fettsäuren (FFA) im Blut. Daraus resultiert eine Reihe von metabolischen Funktionsstörungen. Seit der Erkenntnis, dass FFA auch tiefgreifende Effekte auf die Genexpression ausüben können, ist es wichtig herauszufinden, welche Fettsäuren welche Gene und in welchen Zellen regulieren können. Diesem Zweck dient auch die vorliegende Studie. In der präsentierten Untersuchung wurden vier verschiedene humane Zelltypen (Fibroblasten (FB), Hepatocyten (HepG2), Endothel- (CAEC) und glatte Gefäßmuskelzellen aus Koronararterien (CASMC)) mit gesättigter Fettsäure Palmitat und ungesättigter Fettsäure Linoleat für 20 Stunden inkubiert. Die Expression der am Fettmetabolismus beteiligten Gene (Delta 9-Desaturase, PPAR alpha, PPAR gamma, FATP-1, CD36, IL-6) wurde mittels Polymerase-Ketten-Reaktion (PCR) bestimmt. Als interne Kontrolle der eingesetzten DNA-Menge diente humane glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase. Die Identifizierung der Gene erfolgte mittels Agarosegelelektrophorese. Die Effekte von Palmitat und Linoleat in den untersuchten Geweben wurden verglichen und sowohl tabellarisch als auch grafisch dargestellt. Die statistische Analyse wurde mit Hilfe von "Student's t test" durchgeführt. Die Ergebnisse zeigten...

Suchtmittel bewirken langfristige Veränderungen im Belohnungssystem, wobei insbesondere der Neurotransmitter Glutamat eine wichtige Rolle spielt. Dies kann zur Ausbildung einer Sucht führen, die definiert ist als die zwanghafte Einnahme eines Suchtmittels trotz Kenntnis der damit verbundenen negativen Konsequenzen. Häufig wiederkehrende Rückfälle, die z.B. durch Suchtmittel-assoziierte Cues induziert werden, stellen eines der größten Probleme bei der Behandlung von Sucht dar. Die Suche nach Substanzen, die Cue-induziertes Craving reduzieren (sogenannte Anti-Craving-Substanzen), gewinnt daher zunehmend an Bedeutung. Als Tiermodell zur Bestimmung von Cue-induziertem Suchtmittelsuchverhalten wird z.B. die konditionierte Platzpräferenz (CPP) eingesetzt. Die durch eine Testsubstanz verursachte Reduktion der Suchtmittel-CPP Expression kann dabei auf eine mögliche therapeutische Verwendung als Anti-Craving-Substanz hinweisen. In Manuskript 1 (MS1) der vorliegenden Arbeit wurde untersucht, ob die bei Alkoholikern wirksamen Anti-Craving-Substanzen Acamprosat (funktioneller NMDA-Rezeptor-Antagonist), Naloxon (mu-Opiat-Rezeptor-Antagonist) oder eine Kombination aus beiden die Expression einer Kokain- oder Morphin-CPP reduzieren. Außerdem wurde die Methode des wiederholten Testens der CPP Expression evaluiert. Es zeigte sich...

Duncan, Melinda K.; Survivin (BIRC5), a member of the inhibitor of apoptosis family of proteins (IAP) is a 16.5kDa protein that is highly over-expressed in many types of cancer including colorectal cancer (CRC), but is almost undetectable in normal tissue. It has been considered a biomarker for tumor progression. Over-expression of survivin predicts poor patient survival and high tumor recurrence rates (Sarela, Macadam et al. 2000). Preliminary large scale expresseion analysis between healthy and diseased colon revealed that most of the genes that were expression-correlated with survivin were classified as cell-cycle and mitosis genes. Survivin itself is expressed preferentially during mitosis and is needed for spindle assembly checkpoint (Mita, Mita et al. 2008). Survivin is known to interact with a high number of signaling molecules, regulators, transcriptional networks that, are involved in its functions directly or indirectly (Altieri 2008). To appreciate the complexity it is not enough to think of survivin alone, but it becomes apparent by performing network analyses that link survivin to multiple signaling circuits. This led us to predict that there may be many genes that are simultaneously regulated with survivin by a network of transcriptional regulators. As the expression correlation analysis showed that there is a specific cohort of genes that are expression-correlated with survivin...